膠體金法怎麼用?

膠體金與標記蛋白簡介

在不同還原劑的作用下，由氯金酸（HAuCL4）可以製備出金顆粒直徑在0.8-500nm的膠體金。製備好的膠體金保存時間較長，可在4℃保存6個月以上，或在室溫下可保存1-2個月。

膠體金在做為標記探針時，不同用途選用的膠體金的直徑范圍也不同，用於免疫快速檢測的膠體金顆粒直徑范圍一般在3-40nm間。

膠體金粒子表面為一層AuC12—，粒子表面帶有負電荷金顆粒表麵包被一層生物大分子（如蛋白）可以穩定和保護金顆粒，維持膠體的穩定，可防止外來電解質的影響使粒子相互凝聚。

膠體金粒子對蛋白的吸附作用取決於溶液的pH值，這是因為蛋白中氨基酸的凈電荷取決於溶液的pH值，在pH=pI時蛋白溶液呈中性。在pH=pI時蛋白溶解度最小，水化程度最小，更容易吸附到疏水的金粒子表面。但在實際的膠體金探針製備中，一般膠體金調整為pH=pI+0.5，這樣更有利於結合更穩定。

膠體金探針所用的蛋白通過三種機制於吸附於金顆粒的表面：一、金粒子所帶負電荷與蛋白部分鹼性氨基酸（如賴氨酸，精氨酸，pH均大於10）所帶陽性電荷的最初的相互吸引；二、蛋白通過某些疏水性氨基酸殘基（包括色氨酸）與金粒子表面之間的疏水吸附作用；三、蛋白中的半胱氨酸或甲硫氨酸的硫基與金粒子間的電子對的共用以共價鍵結合。

用於製備膠體金探針的蛋白需要進行前處理後才能與金顆粒更好的結合。未經處理的蛋白質一般來說均含有較高濃度的鹽分，而高濃度的鹽分往往干擾蛋白與膠體金的吸附結合，或導致膠體金粒子的凝聚，所以首先要去除蛋白質溶液中的鹽分。凍干蛋白或高濃度蛋白溶液中蛋白分子常凝聚為多聚大分子，可同時與多個膠體金粒子結合，影響探針的靈敏度，分散蛋白分子為單體也是蛋白前處理的重要一項。處理標記的使其蛋白具有適當的分子量，如果蛋白分子量過小（30kD），形成的蛋白複合體往往是不穩定。把分子量過小的蛋白與其它蛋白（如BSA，牛血清蛋白等）結合後，能製備出穩定性更佳的探針。分子量過大時，影響探針的靈敏度，在已知蛋白的結構與活性中心的前提下，去除對活性無影響的結構部分可提高標記的靈敏度。

二、免疫膠體金產品原理及應用

膠體金探針大多用單克隆抗體標記，應用免疫層析法製成快速診斷產品，具有較高的特異性，而且相對穩定性很高。檢測一般在5-10min就可以讀出結果，相比其它方法（如ELISA需1-2h,PCR需要時間更長）大大的縮短了檢測時間。檢測樣（可以是組織液、血清、尿液、糞便等）只需做非常簡單的處理或不做前處理即可進行檢測。結果以顏色的變化讀取，不需要特別儀器設備。

免疫膠體金法快速檢測試紙利用層析原理、雙抗體夾心法或免疫競爭法或間接法，應用被檢測物質的特異性和能與其發生特異反應的抗原或抗體，並以金顆粒為顯色劑達到快速檢測目的。

使用快速檢測產品時，在卡的加樣孔加入待測樣，利用層析原理不斷的向另一端層析，隨著層析的進行，樣本中的待測成分固定於測試線（T線）並以顏色變化顯示，並以對照線（即控制線，C線）確保檢測的有效性。

什麼是膠體金法?為什麼叫膠體金法?搜狗問問

膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，並由於靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，形成帶負電的疏水膠溶液，由於靜電作用而成為穩定的膠體狀態，故稱膠體金。

膠體金在弱鹼環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由於這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。 膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA等。

根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而使膠體金廣泛地應用於免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。 膠體金標記，實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。

吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸製備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。

這種球形的粒子對蛋白質有很強的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結合。

膠體金標記法測尿HCG原理?

HCG（絨毛膜促性腺激素）是婦產科醫生們所熟悉和最常使用的「妊娠試驗」激素。

它是由α和β二聚體的糖蛋白組成。 但α-亞單位為垂體前葉激素所共有。

β-亞單位是HCG所特異的。 完整的HCG全部是由胎盤絨毛膜的合體滋養層產生。

其主要功能就是刺激黃體，有利於雌激素和黃體酮持續分泌， 以促進子宮蛻膜的形成，使胎盤生長成熟。 現代認為HCG是由滋養層過渡型細胞和合體細胞產生的。

在妊娠的前8周增值很快，以維持妊娠。 在大約孕8周以後，HCG逐漸下降，直到大約20周達到相對穩定。

正常參考值： 血HCG的正常值<10μg/L， β-HCG的正常值<3.1μg/L。 妊娠不同時期以及各孕婦之間血清HCG絕對值變化很大， 既人同人是不相同的，沒有可比性，只可自身比較。

一般非孕婦女血HCG<100IU/L 在妊娠最初3個月，HCG水平每2.2±0.5天約升高一倍。 尿-HCG(HCG半定量法)： 非孕婦女 <25IU/L， 孕40天 >5000IU/L， 孕60-70天 >（8-32）*104IU/L（清晨尿HCG水平最高，接近血清水平）。

正常妊娠期間血清HCG水平： 妊娠周數 HCG(IU/L) 0.2-1周 5-50 1-2周 50-500 2-3周 100-5000 3-4周 500-10000 4-5周 1000-50000 5-6周 10000-100000 6-8周 15000-200000 2-3月 10000-100000 診斷早期妊娠： 一般正常人β-HCG放免測定值小於3.1， 如果超過5就可以考慮受孕可能，如果超過10基本可以確定懷孕。 孕後35-50天HCG可升至大於2500IU/L。

多胎妊娠者的尿-HCG常多於一胎妊娠者。 產後9天或人工流產術後25天，血清HCG應恢復正常。

如不符合這一情況，則應考慮有異常可能。 宮外孕的早期診斷主要是檢測血HCG（絨毛膜促性腺激素）。

因HCG是妊娠時所分泌的特異性激素，所以β-HCG可用於協助宮外孕早期未破裂的診斷。 正常發育的絨毛所分泌的HCG量很大，每天的滴度不斷的快速上升，每48小上升66%以上。

既如果β-HCG每兩天增加的量大於66%，可以診斷為宮內妊娠； 而如果增加的量小於66%，則宮外孕或宮內孕發育不良的可能性很大。 對於宮外孕，由於輸卵管肌層菲薄，血供不良，HCG分泌量很低。

每天升值較少。 48小時上升不到50%。

（但有一部分人最初的HCG上升正常） 如果用HCG難以確認，還可用血孕酮來做輔助性診斷。 宮外孕患者的血孕酮水平低，這是公認的。

故可作為早期診斷方法之一。 臨界值為63nmol/L. 進一步還可以進行B超檢查，尤其是「陰超」檢查對診斷宮外孕很有幫助。

婦女受孕後，從第9-11天起即可測出血中β-HCG升高， 以後每兩天β-HCG的量可升高2倍（就算有先兆流產，HCG的增加比率不會變）。 比如今天是234，如果後天測出來是450左右就就可認為是正常宮內早孕。

如果連續兩次增加速度緩慢，表明宮外孕或者胚胎不正常發育遲緩。 比如今天是10，後天是15，再2天才17，這樣的HCG值肯定不正常，保胎的成功率極低。

如果HCG值持續而明顯的下降，就算B超測到胎心也最好做清宮手術，表明胎兒其實已經腦死亡。 很多人為了確定是否懷孕而去做B超，其實做B超一般需要血HCG達到6000以上或正常宮內孕6周左右，「陰超」才可顯示宮內妊娠囊的「雙環征」圖象，而早期看不到孕囊就以為是宮外孕是錯誤的。

因有的是時間太短或胚胎流失，也可能發育遲緩。 既使看到也要必須注意真孕囊與假孕囊的區別。

超聲檢查如果發現子宮增大、宮腔內未見妊娠囊、子宮外附件區見囊性腫塊且邊界不清， 可「懷疑」為宮外孕。 還可以進行診斷性刮宮，見絨毛則能證實是宮內妊娠， 如果未見絨毛或病理報告內膜呈A-S反應，應懷疑為宮外孕。

如果HCG增加速度非常快，表明有葡萄胎的可能，必須緊密監測。 當然也有可能是雙胞胎。

而在更年期、排卵期及雙側卵巢切除術均可致黃體生成素（LH）升高， 因LH與HCG的α-肽鏈組成相同，而α亞單位又為「垂體前葉激素」所共有。 所以當採用抗-HCG抗體做妊娠試驗時，就會因陽性而造成「假孕」現象。

此時可用β-HCG的單克隆-酶免疫測定來做鑒別。 另外：β-HCG升高還有下列幾種可能：正常懷孕、雙胞胎，葡萄胎、或某些疾病或腫瘤。

如在內分泌疾病中，如腦垂體疾病、甲狀腺功能亢進、婦科疾病如卵巢囊腫、子宮癌等HCG也可增高。 近年來發現惡性腫瘤如默契胎瘤、胰腺癌、胃癌、肝癌、***癌、肺癌等血中HCG也可升高 因此在腫瘤科，將HCG看作是癌標志物之一。

但必需結合臨床情況及其它檢查結果，通過綜合分析才能正確判斷。

什麼是膠體金法

膠體金是一種常用的標記技術，是以膠體金作為示蹤標志物應用於抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，有其獨特的優點。

近年已在各種生物學研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術幾乎都使用其標記。

同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學以至生物晶元中都可能例用到。1971年Faulk 和Taytor將膠體金引入免疫化學，此後免疫膠體金技術作為一種新的免疫學方法，在生物醫學各領域得到了日益廣泛的應用。

目前在醫學檢驗中的應用主要是免疫層析法（ immunochromatogra-phy）和快速免疫金滲濾法（Dot-immuogold filtration assay DIGFA），用於檢測 HBsAg、HCG 和抗雙鏈DNA抗體等，具有簡單、快速、準確和無污染等優點。 免疫膠體金技術的基本原理：膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，並由於靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，形成帶負電的疏水膠溶液，由於靜電作用而成為穩定的膠體狀態，故稱膠體金。

膠體金在弱鹼環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由於這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA等。

根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而使膠體金廣泛地應用於免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。膠體金標記，實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。

吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸製備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。

這種球形的粒子對蛋白質有很強的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結合，因而在基礎研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。免疫金標記技術（Immunogold labelling techique） 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標蛋白結合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而用於定性或半定量的快速免疫檢測方法中，這一反應也可以通過銀顆粒的沉積被放大，稱之為免疫金銀染色。

常用的免疫膠體金檢測技術：（1）免疫膠體金光鏡染色法細胞懸液塗片或組織切片，可用膠體金標記的抗體進行染色，也可在膠體金標記的基礎上，以銀顯影液增強標記，使被還原的銀原子沉積於已標記的金顆粒表面，可明顯增強膠體金標記的敏感性。（2）免疫膠體金電鏡染色法可用膠體金標記的抗體或抗抗體與負染病毒樣本或組織超薄切片結合，然後進行負染。

可用於病毒形態的觀察和病毒檢測。斑點免疫金滲濾法（3）應用微孔濾膜（如膜）作載體，先將抗原或抗體點於膜上，封閉後加待檢樣本，洗滌後用膠體金標記的抗體檢測相應的抗原或抗體。

（4）膠體金免疫層析法將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上後，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑後相互反應，再移動至固定的抗原或抗體的區域時，待檢物與金標試劑的結合物又與之發生特異性結合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結果。該法現已發展成為診斷試紙條，使用十分方便。

為什麼都說金標法不準

金標法是體外診斷艾滋病的一種方法，在國際上屬於較為先進的方式，它的優點有靈敏、特異、快速、便捷且準確率高，使用特製的檢驗盒，在短時間內就可以獲知檢驗結果。

又叫作免疫金標記技術。檢測是，將血滴在試紙上，20分鍾後觀察試紙有沒有顏色變化，如果沒有顏色變化，就是陰性，如果有顏色變化則為陽性。

金標法檢測艾滋病是當前比較先進的一種技術，準確率是很高的，並且快速便捷。在進行操作的過程中，不要加過量的血，容易引起假陽性。

並且最好在15-25攝氏度的室溫下進行檢測，只要保存得當，操作方式正確，準確度不會受到影響。但金標法的準確率與背後的廠家實力相關，最好的高端試紙檢測，更準確一些。

好的品牌，可達99%以上。